Компьютерные программы для испытательных лабораторий
Calculation in Microbiology Method Verification 16140-3  xls
Микробиологические исследования: оценивание неопределенности измерений количественных микробиологических величин
Руководство ЕВРАХИМ / СИТАК CG 4. Количественное описание неопределенности  в аналитических
измерениях.  Третье издание.


Скачать документ можно по следующей ссылке:

     Согласно требованиям ГОСТ ISO/IEC 17025-2019 и критериев аккредитации (Приказ МЭР № 707 от 26.10.2020 г.) верификация методик с постановкой эксперимента в ходе которого используются стандартные образцы (тестовые штаммы микроорганизмов) стала обязательной для микробиологических лабораторий  и  эксперты Росаккредитации сейчас  часто обращают на это внимание. А о важности оценки неопределенности   результатов микробиологических измерений в целях соответствия лаборатории ГОСТ ISO/IEC 17025-2019 было отдельно проговорено на VII Всероссийском съезде экспертов по аккредитации (доступно в форме видеозаписи, спикер - заместитель руководителя ФСА Д.В Гоголев).  Для микробиологических количественных исследований  оценка неопределённости особенно актуальна, так как в имеющихся и используемых в России  нормативных документах (методиках) на исследования по различным микробиологическим  показателям  неопределённость отсутствует. В мировой практике уже давно сложилась тенденция, что лаборатории, которые хотят соответствовать международному стандарту ISO 17025,  самостоятельно для каждого исследования оценивают  неопределенность результатов микробиологических  количественных исследований непосредственно  в своих лабораториях, применяющих  соответствующие микробиологические методики.    
Руководство ЕВРАХИМ / СИТАК. Неопределенность измерения, связанная с отбором пробы.


Скачать документ можно по следующей ссылке:
ISO 16140-3:2021  Микробиология пищевой цепи. Метод валидации. Часть 3. Протокол верификации контрольных методов и валидированных альтернативных методов в одной лаборатории. Ссылка для приобретения этого стандарта на английском языке -  https://www.iso.org/ru/standard/66324.html
ISO/TS 19036:2006 (ГОСТ Р 54502-2011) - Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководство по оценке неопределенности измерений для количественных определений (Международная организация по стандартизации прекратила действие ISO/TS 19036:2006).   Скачать ISO/TS 19036:2006 (ГОСТ Р 54502-2011).
ISO/TS 19036:2006 - статус ЗАМЕНЁН.
QSOP 4.  UNCERTAINTY OF MEASUREMENT IN TESTING.  Скачать.
ISO 29201:2012 Качество воды - изменчивость результатов испытаний и неопределенность измерений методами микробиологического подсчета.  Скачать ISO 29201 со стороннего Иранского сайта.
Для расчёта неопределенности результатов исследований для микробиологических методик
могут применяться следующие документы:
Для верификации  микробиологических методик, включая методики ПЦР, может применяться специально адаптирванный для верификации методик   микробиологических иссследований следующий документ:
Видеоматериалы:
Валидация и верификация микробиологических методов. C чего начинать?                          ЧОУ ДПО «Учебный центр «Содействие».

Учебные курсы:
     Сертификаты валидации микробиологических методик и соответствующие отчёты (рабочие характеристики методик, котрые вы можете использовать для верификации этих методик), вы можете посмотреть на  веб-сайтах разработчиков этих методик по следующим ссылкам:

• Мicroval  -  https://microval.org/en/issued-certificates/
• Afnor -   https://nf-validation.afnor.org/en/food-industry/#discover-certified-methods
• NordVal -  https://www.nmkl.org/index.php/en/nordval


   Пример отчёта по валидации альтернативного метода разработанного на основе ISO 11290-1:2017  можно скачать по ссылке -  iQ-Check Listeria monocytogenes II  (значение LOD50, используемое при верификации, смотреть на странице 9).
Органы по сертификации, использующие стандарты ISO 16140-2 и ISO 16140-6 для валидации микробиологических методик.
     Некоторые международные валидированные методики, которые можно полноценно верифицировать, готовятся к изданию в России и Казахстане на русском языке.  Пример валидированной методики на русском языке, которая скоро будет доступна для внедрения в странах СНГ -  межгосударственный стандарт   ГОСТ  ISO 11290-2:2017. В России и в мире ПЦР-лаборатории часто используют валидированные методики (преимущественно иностранные) и соответственно их можно верифицировать по стандартным схемам, изложенным в  ISO 16140-3:2021.
Валидация и верификация микробиологических методов. Доклад со II Всероссийской конференции "Аккредитация. Компетентность"

Работа с штаммами микроорганизмов на фармацевтическом предприятии.
Контроль качества питательных сред. В это вебинаре лектор дополнительно рассказывает про сертифицированные тестовые штаммы с известным содержанием микроорганизмов(лиофилизированный штамм с известной концентрацией). Имея такой штамм, лабораториям  проще проводить верификацию качественных микробиологических методик (по протоколу №3 из ISO 16140-3).
Стоимость программы LControl-MB  -  12800 руб.
Поставка программы осуществляется электронной почтой.
Почтой России высылается  договор, акт, лицензия на использование программы (бланк).
Лицензия на использование программы предоставляется на одну организацию (филиал).
Предоставление лицензий дополнительным филиалам организации - на договорной основе с учётом скидки.
Тел. 8-913-120-97-57
E-mail:  SfLab@mail.ru


Документ ISO 16140-3:2021 (для верификации микробиологических методик)  в 2021 году был доступен только на английском языке, а сейчас этот международный стандарт переведён ФГБУ «Российский институт стандартизации» на русский язык  и его можно у них приобрести.  Ссылка для покупки -  РСТ  ISO 16140-3:2021  на русском языке
ISO 19036:2019 Микробиология пищевой цепи. Оценка неопределенности измерений для количественных определений (взамен отменённого ISO/TS 19036:2006).  Скачать ISO 19036 со стороннего Иранского сайта.

Вебинар по верификации микробиологических методик - для тех, кто хотя бы немного знает испанский язык. У микробиологических (бактериологических) лабораторий часто возникает вопрос касающийся верификации невалидированных методик. В этом видео дана краткая инструкция и разъяснения о том, как верифицировать невалидированные микробиологические методики в соответствии с ISO 16140-3.
ISO 29201: 2012   Water quality - The variability of test results and the uncertainty of measurement of microbiological enumeration methods.
Пример расчета неопределености результата микробиологического анализа  в программе  LControl-MB. Предварительно на другой вкладке было оценено стандартное отклонение воспроизводимости.
ГОСТ ISO 7218-2015  Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям.
Скачать документ можно по следующей ссылке:

ГОСТ Р 70152-2022 Качество воды. Методы внутреннего лабораторного контроля качества проведения микробиологических и паразитологических исследований.

Часто задаваемые вопросы.
ВОПРОС 1.
Как верифицировать НЕВАЛИДИРОВАННЫЕ  микробиологические методики (методики в которых отсутствуют рабочие характеристики) ?
ОТВЕТ: 
Сейчас (2023г) в России большая часть микробиологических методик являются невалидированными.  Постепенно,  как нам обещали разработчики микробиологических методик (ГОСТов),  ситуация будет меняться  и  валидированные микробиологические методики будут издаваться в России и в странах СНГ. Многие наши микробиологические методики (ГОСТы на основе ISO) являются переводом Европейских методик. В Европе эти методики, которые действуют и у нас в виде перевода на русский язык, сейчас активно пересматриваются и валидируются, многие уже валидированы, но пока ещё не все. Через какое то время переводы валидированных методик будут появляться и у нас.

Нормативный документ ISO 16140-3:2021 содержит Приложение F. В Приложении F описана схема того, как верифицировать референсные НЕвалидированные микробиологические методики (например, ГОСТы без рабочих характеристик). В ISO 16140-3:2021 сказано, что до конца 2027 года будет действовать переходный период. До конца 2027 года верификацию невалидированных методик следует производить, применяя временные процедуры, изложенные в Приложении F этого стандарта. Расчёты и оценка в этом случае похожи на базовые алгоритмы, применяемые для валидированных методик, но с некоторыми особенностями. Расчёты, небходимые для верификации качественных и количественных НЕвалидированных и валидированных методик можно выполнить в программе «LControl-MB»
  

ВОПРОС 2.
Что такое матричная неопределённость в микробиологии?
ОТВЕТ: 
Это неопределенность, возникающая в результате того, что тестируемая порция (навеска) не является действительно репрезентативной  для лабораторного образца (пробы) и в принятой на анализ пробе может наблюдаться  существенная неравномерность распределения микроорганизмов в разных частях пробы.  Исполнитель из лабораторной пробы берет нужную навеску и для достижения  большей точности анализа эта навеска берется из разных частей лабораторной пробы (чтобы усреднить). Но как бы лаборант не старался, он не сможет добиться абсолютной репрезентативности взятой навески, поэтому возникает матричная неопределенность.  Если материал является  эффективно однородным, например, хорошо перемешанные жидкости (молоко, вода, напитки), то неопределенность матрицы, как ожидается, будет небольшой. Однако хорошо известно, что естественное микробное загрязнение (контаминация) определенных пищевых продуктов (особенно твердых, обработанных или ферментированных продуктов и т.д.) может быть очень неоднородным, и это может вносить большой вклад в  суммарную неопределенность за счет существенной матричной составляющей неопределённости.  Например, лаборантка делает отбор тестовой порции (навески) из батона колбасы и очевидно, что далее будет оцениваться уже небольшая порция от поступившего лабораторного образца и это вносит дополнительную неопределенность (матричную), поскольку далее оценивается взятая навеска, а результат будет выдаваться на весь лабораторный образец.
Статья от ЗАО РОСА. БИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ:
АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР РЕЗУЛЬТАТОВ.   Скачать статью

Верификация методик микробиологических исследований.

ВОПРОС 3.
Подлежат ли верификации путём постановки серии экспериментов качественные методы микробиологического (бактериологического) анализа?
ОТВЕТ: 
Да, верификации подлежат и количественные и качественные методы микробиологических исследований.                       В ISO 16140-3:2021 предусмотрено три протокола (алгоритма) оценки вашей способности начать правильно применять  микробиологические методики качественного анализа. Выполняется несколько экспериментов. Выбор протокола (алгоритма) оценки зависит от вида тестовых штаммов микроорганизмов, которые имеются в вашей лаборатории. Штаммы могут быть от  коллекций культур,  пользовательские лабораторные коллекции,  эталонные материалы (включая коммерческие эталонные материалы, например, лиофилизированный штамм с известной концентрацией).
     Ввиду поступавших запросов на комплексную автоматизацию реализации ряда процедур, выполнение которых поможет микробиологическим (бактериологическим) лабораториям повысить качество своей работы и будет способствовать успешному прохождению аккредитации и подтверждению компетентности (ПК), было разработано программное средство LControl-MB. Основное предназначение данной компьютерной программы -  это автоматизация  верификации микробиологических методик и расчет неопределённости результатов микробиологических исследований различных объектов  исследований (матриц), контроль питательных сред, контроль мембранных фильтров (фильтрующих материалов). Расчет неопределенности в программе производится для каждого рутинного количественного анализа с возможностью ведения журнала.  Дополнительно в программе реализован расчет достоверности средних значений, требуемый при использовании некоторых микробиологических НД.  Программа  верифицирована, а сейчас  уже внедрена и успешно эксплуатируется во  многих коммерческих и государственных (бюджетных) лабораториях. Программу можно приобрести, обратившись к нам по указанной электронной почте или по телефону.
  
ВОПРОС 4.
Как проводить искусственную контаминацию ("заражение") тестируемых образцов (тестовых порций) ?
ОТВЕТ: 
В ISO 16140-3:2021 по поводу инокуляции ("заражение") сказано просто и кратко - Подготовленный инокулят вводят непосредственно в исходную суспензию отдельных тестируемых порций. После инокуляции суспензию тщательно перемешивают. Использование стрессированных культур рекомендуется, но не обязательно. Штаммы могут быть от культурных коллекций, пользовательские лабораторные коллекции, эталонные материалы (включая коммерческие эталонные материалы, например, лиофилизированный штамм с известной концентрацией). А по поводу выращивания штамма в питательной среде в условиях, обеспечивающих оптимальный рост штамма (например, культивирование в течение ночи), в ISO 16140-3:2021 рекомендуют следовать процедурам, указанным в ГОСТ ISO 11133-2016 раздел 5.  В 16140-3:2021 изложено как достигать требуемых уровней инокуляции тестовых порций лабораторного образца. Способы инокуляции на этапе верификации методик и на этапе расчёта стандартного отклонения воспроизводимости, которое потом будет использоваться для расчёта неопределенности, идентичны, но при верификации нам ещё в большей степени важно получить тестовые порции лабораторного образца определенного уровня инокуляции.
Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований   Скачать учебное пособие с  сайта  micro-lab.org
Предварительно ознакомится с ISO 16140-3:2021 на английском языке  можно открыв  следующую интернет-страницу
другого стороннего сайта:   https://fliphtml5.com/skigm/sbne  (скопируйте выделенный текст и вставьте в
адресную строку своего браузера, затем откройте эту страницу).

Расчет неопределенности результатов микробиологических исследований.
Программа LControl-MB.


Новости:
Появились новые методические указания - МУК 4.2.3963-23 «Бактериологические методы исследования воды». МУК 4.2.3963-23 введён в действие с 01.12.2023г. В связи с этим  были отменены несколько старых нормативных документов (МУК,МУ). Основной отменённый документ, которым пользовались многие лаборатории - МУК 4.2.1018-01 «Методы санитарно-микробиологического исследования питьевой воды». МУК 4.2.3963-23 содержит новые методы и показатели, ранее отсутствовавшие в документах.
Разбор ситуации с внедрением  нового  МУК 4.2.3963-23  можете  посмотреть открыв видеоролик по следующей ссылке  -  https://youtu.be/EiaTPvBL3nQ?si=HgWaIiqQJJeSp96J
Свои разъяснения по поводу внедрения в деятельность лабораторий МУК 4.2.3963-23 уже дал  ФБУЗ «ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ГИГИЕНЫ И ЭПИДЕМИОЛОГИИ». Ознакомиться с этими разъяснениями можно нажав по следующей ссылке  -  Информирование о новых НД
Но основные разъяснения по поводу МУК 4.2.3963-23 должна дать Федеральная служба по аккредитации, ведь эксперты Росаккредитации прежде всего будут руководствоваться своими ведомственными документами и регламентами, а разъяснения Роспотребнадзора для них второстепенны. Многие лаборатории уже подали соответствующие запросы в ФСА и ожидают ответа.
Многие эксперты РА обращают внимание на наличие в акте по верификации микробиологических методик экспериментального подтверждения возможности проводить анализы с надлежащим качеством. Официальный документ, которым следует руководствоваться при верификации микробиологических методик - ISO 16140-3:2021 (меется на русском языке). Произвести верификацию (внедрение)  МУК 4.2.3963-23 в полном соответстви с ISO 16140-3:2021, сделать оценку неопределенности, чтобы быть готовым к процедуре РОА, вы сможете с помощью нашего программного средства  "LControl-MB".
Разъяснения Росаккредитации на которые ссылается  Федеральный центр гигиены и эпидемиологии  о возможности применения национальных и межгосударственных документов в области стандартизации, разработанных на основе (взамен) действующих -
https://fsa.gov.ru/press-center/info/8957/
Неопределенность в микробиологии, обусловленная эффектом матрицы.
Скачать руководство Eurachem, посвященное аккредитации  микробиологических лабораторий можно по следующей ссылке:
верификация микробиологических показателей воды и продуктов питания
ВОПРОС 5.
Требуется ли микробиологическим лабораториям использовать для внутрилабораторного контроля качества (ВЛКК) карты Шухарта?

ОТВЕТ: 
Да. Микробиологическим (бактериологическим) лабораториям при контроле достоверности результатов необходимо применять контрольные карты (карты Шухарта), чтобы можно было выявить тенденции и применить статистические методы анализа и интерпретации результатов. Об этом чётко сказано в ГОСТ ISO/IEC 17025-2019 пункт 7.7.1.  подпункт d. О целесообразности и о практической применимости  контрольных карт в микробиологии неоднократно упомянуто в официальных документах (ГОСТ, Руководство)  и проговорено на семинарах для микробиологов.

    В руководстве Eurachem (ссылку для скачивания разместили выше), посвящённом аккредитации  микробиологических лабораторий сказано следующее:
Программа внутреннего контроля качества должна быть адаптирована к фактической частоте испытаний, проводимых лабораторией. Для ежедневной интерпретации контрольных значений (
*результатов контрольных процедур) следует применять статистические правила, например изложенные в документе [51, 52]. Необходимо строить  график контрольных значений (*контрольные карты, карты Шухарта), чтобы облегчить визуальную оценку тенденций.

*НАШЕ ПРИМЕЧАНИЕ (дополнение для улучшения восприятия изложенного в руководстве Eurachem текста).

   В компьютерной программе LControl-MB, чтобы микробиологическая лаборатория могла соответствовать требованиям ГОСТ ISO 17025, реализован контроль достоверности с применением контрольных карт Шухарта (применяются адаптированные для микробиологов виды контроля с учетом специфики микробиологических исследований и некоторых особенностей).
Разъяснения Росаккредитации по вопросу о возможности применения лабораториями МУК 4.2.3963-2023https://vk.com/doc281713496_670637153?hash=9gCyLKXFHPJHmd9kvG58gD2rsvScUXywuoz9Jh7nIzX
ВОПРОС 6.
Требуется ли микробиологическим лабораториям делать расчет неопределенности для качественных методик исследований?

ОТВЕТ: 
В руководстве по аккредитации микробиологических лабораторий и в руководстве ILAC G17 (Росаккредитация уже давно присоединилась к международной организации ILAC) сказано следующее: Для количественных измерений, когда конечные результаты выражаются качественно (например, годен/не годен), оценка неопределенности измерений также применима (в соответствии с ILAC G17).
скачать МУК 3963
С 1 мая 2024г. вступил в действие новый ГОСТ для микробиологов.
ГОСТ Р 71327-2024 Качество воды. Методы определения санитарно-микробиологических и санитарно-паразитологических показателей при оценке воды поверхностных водных объектов и сточных вод.
Тел. 8-913-120-97-57
OOO "СофтЛаб" (ООО ТехноЛаб)
Компьютерные программы для лабораторий
E-mail:  SfLab@mail.ru