Компьютерные программы для испытательных лабораторий
Микробиологические исследования: оценивание неопределенности измерений количественных микробиологических величин
Руководство ЕВРАХИМ / СИТАК CG 4. Количественное описание неопределенности в аналитических
измерениях. Третье издание.
Скачать документ можно по следующей ссылке:
измерениях. Третье издание.
Согласно требованиям ГОСТ ISO/IEC 17025-2019 и критериев аккредитации (Приказ МЭР № 707 от 26.10.2020 г.) верификация методик стала обязательной для микробиологических лабораторий и эксперты Росаккредитации сейчас часто обращают на это внимание. А о необходимости оценки неопределенности результатов микробиологических измерений в целях соответствия лаборатории ГОСТ ISO/IEC 17025-2019 было отдельно проговорено на VII Всероссийском съезде экспертов по аккредитации (доступно в форме видеозаписи, спикер - заместитель руководителя ФСА Д.В Гоголев). Для микробиологических количественных исследований оценка неопределённости особенно актуальна, так как в имеющихся и используемых в России нормативных документах (методиках) на исследования по различным микробиологическим показателям неопределённость отсутствует. В мировой практике уже давно сложилось, что лаборатории, которые хотят соответствовать международному стандарту ISO 17025, самостоятельно для каждого исследования оценивают неопределенность результатов микробиологических количественных исследований непосредственно в своих лабораториях, применяющих микробиологические методики.
Руководство ЕВРАХИМ / СИТАК. Неопределенность измерения, связанная с отбором пробы.
Скачать документ можно по следующей ссылке:
ISO 16140-3:2021 Микробиология пищевой цепи. Метод валидации. Часть 3. Протокол верификации контрольных методов и валидированных альтернативных методов в одной лаборатории.
ISO/TS 19036:2006 (ГОСТ Р 54502-2011) - Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководство по оценке неопределенности измерений для количественных определений (Международная организация по стандартизации прекратила действие ISO/TS 19036:2006). Скачать ISO/TS 19036:2006 (ГОСТ Р 54502-2011).
ISO/TS 19036:2006 - статус ЗАМЕНЁН.
ISO/TS 19036:2006 - статус ЗАМЕНЁН.
QSOP 4. UNCERTAINTY OF MEASUREMENT IN TESTING. Скачать.
ISO 29201:2012 Качество воды - изменчивость результатов испытаний и неопределенность измерений методами микробиологического подсчета. Скачать ISO 29201 со стороннего Иранского сайта.
Для расчёта неопределенности результатов исследований для микробиологических методик
могут применяться следующие документы:
могут применяться следующие документы:
Для верификации микробиологических методик, включая методики ПЦР, может применяться специально адаптирванный для верификации методик микробиологических иссследований следующий документ:
Видеоматериалы:
Валидация и верификация микробиологических методов. C чего начинать? ЧОУ ДПО «Учебный центр «Содействие».
Учебные курсы:
Calculation in Microbiology Method Verification 16140-3 xls
Сертификаты валидации микробиологических методик и соответствующие отчёты (рабочие характеристики методик, котрые вы можете использовать для верификации этих методик), вы можете посмотреть на веб-сайтах разработчиков этих методик по следующим ссылкам:
• Мicroval - https://microval.org/en/issued-certificates/
• Afnor - https://nf-validation.afnor.org/en/food-industry/#discover-certified-methods
• NordVal - https://www.nmkl.org/index.php/en/nordval
Пример отчёта по валидации альтернативного метода разработанного на основе ISO 11290-1:2017 можно скачать по ссылке - iQ-Check Listeria monocytogenes II (значение LOD50, используемое при верификации, смотреть на странице 9).
• Мicroval - https://microval.org/en/issued-certificates/
• Afnor - https://nf-validation.afnor.org/en/food-industry/#discover-certified-methods
• NordVal - https://www.nmkl.org/index.php/en/nordval
Пример отчёта по валидации альтернативного метода разработанного на основе ISO 11290-1:2017 можно скачать по ссылке - iQ-Check Listeria monocytogenes II (значение LOD50, используемое при верификации, смотреть на странице 9).
Органы по сертификации, использующие стандарты ISO 16140-2 и ISO 16140-6 для валидации микробиологических методик.
Некоторые международные валидированные методики, которые можно полноценно верифицировать, готовятся к изданию в России и Казахстане на русском языке. Пример валидированной методики на русском языке, которая скоро будет доступна для внедрения в странах СНГ - межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 11290-2:2017. В России и в мире ПЦР-лаборатории часто используют валидированные методики (преимущественно иностранные) и соответственно их можно верифицировать по стандартным схемам, изложенным в ISO 16140-3:2021.
Расчет неопределенности результатов микробиологических исследований.
Программа LControl-MB.
Валидация и верификация микробиологических методов. Доклад со II Всероссийской конференции "Аккредитация. Компетентность"
Работа с штаммами микроорганизмов на фармацевтическом предприятии.
Контроль качества питательных сред.
Контроль качества питательных сред.
Стоимость программы LControl-MB - 8900 руб.
Поставка программы осуществляется электронной почтой.
Почтой России высылается договор, акт, лицензия на использование программы (бланк).
Лицензия на использование программы предоставляется на одну организацию (филиал).
Предоставление лицензий дополнительным филиалам организации - на договорной основе с учётом скидки.
Тел. 8-913-120-97-57
E-mail: SfLab@mail.ru
Поставка программы осуществляется электронной почтой.
Почтой России высылается договор, акт, лицензия на использование программы (бланк).
Лицензия на использование программы предоставляется на одну организацию (филиал).
Предоставление лицензий дополнительным филиалам организации - на договорной основе с учётом скидки.
Тел. 8-913-120-97-57
E-mail: SfLab@mail.ru
Неопределенность в микробиологии, обусловленная эффектом матрицы.
Документ ISO 16140-3:2021 (для верификации микробиологических методик) до недавнего времени был доступен только на английском языке, а теперь этот международный стандарт переведён ФГБУ «Российский институт стандартизации» и его можно у них приобрести на русском языке. Ссылка для покупки - РСТ ISO 16140-3:2021
ISO 19036:2019 Микробиология пищевой цепи. Оценка неопределенности измерений для количественных определений (взамен отменённого ISO/TS 19036:2006). Скачать ISO 19036 со стороннего Иранского сайта.
Вебинар по верификации микробиологических методик - для тех, кто хотя бы немного знает испанский язык. У микробиологических (бактериологических) лабораторий часто возникает вопрос касающийся верификации невалидированных методик. В этом видео дана краткая инструкция и разъяснения о том, как верифицировать невалидированные микробиологические методики в соответствии с ISO 16140-3.
ISO 29201: 2012 Water quality - The variability of test results and the uncertainty of measurement of microbiological enumeration methods.
Пример расчета неопределености результата микробиологического анализа в программе. Предварительно на другой вкладке было оценено стандартное отклонение воспроизводимости.
ГОСТ ISO 7218-2015 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям.
Скачать документ можно по следующей ссылке:
Скачать документ можно по следующей ссылке:
ГОСТ Р 70152-2022 Качество воды. Методы внутреннего лабораторного контроля качества проведения микробиологических и паразитологических исследований.
Часто задаваемые вопросы.
Вопрос 1.
Как верифицировать НЕВАЛИДИРОВАННЫЕ микробиологические методики (методики в которых отсутствуют рабочие характеристики) ?
Ответ:
Сейчас (2023г) в России большая часть микробиологических методик являются невалидированными. Постепенно ситуация будет меняться и валидированные микробиологические методики будут издаваться. Многие наши микробиологические методики (ГОСТы на основе ISO) являются переводом Европейских методик. В Европе эти методики, которые действуют и у нас в виде перевода на русский язык, сейчас активно пересматриваются и валидируются, многие уже валидированы, но не все. Через какое то время переводы валидированных методик будут появляться и у нас.
Нормативный документ ISO 16140-3:2021 содержит Приложение F. В Приложении F описана схема того, как верифицировать референсные НЕвалидированные микробиологические методики (например, ГОСТы без рабочих характеристик). В ISO 16140-3:2021 сказано, что до конца 2027 года будет действовать переходный период. До конца 2027 года верификацию невалидированных методик следует производить, применяя временные процедуры, изложенные в Приложении F. Расчёты и оценка в этом случае похожи на стандартные, но с некоторыми особенностями. Расчёты, небходимые для верификации качественных и количественных НЕвалидированных и валидированных методик можно выполнить в программе «LControl-MB»
Как верифицировать НЕВАЛИДИРОВАННЫЕ микробиологические методики (методики в которых отсутствуют рабочие характеристики) ?
Ответ:
Сейчас (2023г) в России большая часть микробиологических методик являются невалидированными. Постепенно ситуация будет меняться и валидированные микробиологические методики будут издаваться. Многие наши микробиологические методики (ГОСТы на основе ISO) являются переводом Европейских методик. В Европе эти методики, которые действуют и у нас в виде перевода на русский язык, сейчас активно пересматриваются и валидируются, многие уже валидированы, но не все. Через какое то время переводы валидированных методик будут появляться и у нас.
Нормативный документ ISO 16140-3:2021 содержит Приложение F. В Приложении F описана схема того, как верифицировать референсные НЕвалидированные микробиологические методики (например, ГОСТы без рабочих характеристик). В ISO 16140-3:2021 сказано, что до конца 2027 года будет действовать переходный период. До конца 2027 года верификацию невалидированных методик следует производить, применяя временные процедуры, изложенные в Приложении F. Расчёты и оценка в этом случае похожи на стандартные, но с некоторыми особенностями. Расчёты, небходимые для верификации качественных и количественных НЕвалидированных и валидированных методик можно выполнить в программе «LControl-MB»
Вопрос 2.
Что такое матричная неопределённость в микробиологии?
Ответ:
Это неопределенность, возникающая в результате того, что тестируемая порция (навеска) не является действительно репрезентативной для лабораторного образца (пробы) и в принятой на анализ пробе может наблюдаться существенная неравномерность распределения микроорганизмов в разных частях пробы. Исполнитель из лабораторной пробы берет нужную навеску и для достижения большей точности анализа эта навеска берется из разных частей лабораторной пробы (чтобы усреднить). Но как бы лаборант не старался, он не сможет добиться абсолютной репрезентативности взятой навески, поэтому возникает матричная неопределенность. Если материал является эффективно однородным, например, хорошо перемешанные жидкости (молоко, вода, напитки), то неопределенность матрицы, как ожидается, будет небольшой. Однако хорошо известно, что естественное микробное загрязнение (контаминация) определенных пищевых продуктов (особенно твердых, обработанных или ферментированных продуктов и т.д.) может быть очень неоднородным, и это может вносить большой вклад в суммарную неопределенность за счет существенной матричной составляющей неопределённости. Например, лаборантка делает отбор тестовой порции (навески) из батона колбасы и очевидно, что далее будет оцениваться уже небольшая порция от поступившего лабораторного образца и это вносит дополнительную неопределенность (матричную), поскольку далее оценивается взятая навеска, а результат будет выдаваться на весь лабораторный образец.
Что такое матричная неопределённость в микробиологии?
Ответ:
Это неопределенность, возникающая в результате того, что тестируемая порция (навеска) не является действительно репрезентативной для лабораторного образца (пробы) и в принятой на анализ пробе может наблюдаться существенная неравномерность распределения микроорганизмов в разных частях пробы. Исполнитель из лабораторной пробы берет нужную навеску и для достижения большей точности анализа эта навеска берется из разных частей лабораторной пробы (чтобы усреднить). Но как бы лаборант не старался, он не сможет добиться абсолютной репрезентативности взятой навески, поэтому возникает матричная неопределенность. Если материал является эффективно однородным, например, хорошо перемешанные жидкости (молоко, вода, напитки), то неопределенность матрицы, как ожидается, будет небольшой. Однако хорошо известно, что естественное микробное загрязнение (контаминация) определенных пищевых продуктов (особенно твердых, обработанных или ферментированных продуктов и т.д.) может быть очень неоднородным, и это может вносить большой вклад в суммарную неопределенность за счет существенной матричной составляющей неопределённости. Например, лаборантка делает отбор тестовой порции (навески) из батона колбасы и очевидно, что далее будет оцениваться уже небольшая порция от поступившего лабораторного образца и это вносит дополнительную неопределенность (матричную), поскольку далее оценивается взятая навеска, а результат будет выдаваться на весь лабораторный образец.
Статья от ЗАО РОСА. БИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ:
АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР РЕЗУЛЬТАТОВ. Скачать статью
АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР РЕЗУЛЬТАТОВ. Скачать статью
Верификация методик микробиологических исследований.
Вопрос 3.
Подлежат ли верификации путём постановки серии экспериментов качественные методы микробиологического (бактериологического) анализа?
Ответ:
Да, верификации подлежат и количественные и качественные методы микробиологических исследований. В ISO 16140-3:2021 предусмотрено три протокола (алгоритма) оценки вашей способности начать правильно применять микробиологические методики качественного анализа. Выполняется несколько экспериментов. Выбор протокола (алгоритма) оценки зависит от вида тестовых штаммов микроорганизмов, которые имеются в вашей лаборатории. Штаммы могут быть от коллекций культур, пользовательские лабораторные коллекции, эталонные материалы (включая коммерческие эталонные материалы, например, лиофилизированный штамм с известной концентрацией).
Подлежат ли верификации путём постановки серии экспериментов качественные методы микробиологического (бактериологического) анализа?
Ответ:
Да, верификации подлежат и количественные и качественные методы микробиологических исследований. В ISO 16140-3:2021 предусмотрено три протокола (алгоритма) оценки вашей способности начать правильно применять микробиологические методики качественного анализа. Выполняется несколько экспериментов. Выбор протокола (алгоритма) оценки зависит от вида тестовых штаммов микроорганизмов, которые имеются в вашей лаборатории. Штаммы могут быть от коллекций культур, пользовательские лабораторные коллекции, эталонные материалы (включая коммерческие эталонные материалы, например, лиофилизированный штамм с известной концентрацией).
В компании СофтЛаб разработано программное средство LControl-MB. Основное предназначение данной компьютерной программы - это автоматизация верификации микробиологических методик и расчет неопределённости результатов микробиологических исследований различных объектов исследований (матриц), контроль питательных сред, контроль мембранных фильтров (фильтрующих материалов). Расчет неопределенности в программе производится для каждого рутинного количественного анализа с возможностью ведения журнала. Дополнительно в программе реализован расчет достоверности средних значений, требуемый при использовании некоторых микробиологических НД. Программа верифицирована, а сейчас уже внедрена и успешно эксплуатируется во многих коммерческих и государственных (бюджетных) лабораториях. Программу можно приобрести, обратившись к нам по указанной электронной почте или по телефону.
Вопрос 4.
Как проводить искусственную контаминацию ("заражение") тестируемых образцов (тестовых порций) ?
Ответ:
В ISO 16140-3:2021 по поводу инокуляции ("заражение") сказано просто и кратко - Подготовленный инокулят вводят непосредственно в исходную суспензию отдельных тестируемых порций. После инокуляции суспензию тщательно перемешивают. Использование стрессированных культур рекомендуется, но не обязательно. Штаммы могут быть от культурных коллекций, пользовательские лабораторные коллекции, эталонные материалы (включая коммерческие эталонные материалы, например, лиофилизированный штамм с известной концентрацией). А по поводу выращивания штамма в питательной среде в условиях, обеспечивающих оптимальный рост штамма (например, культивирование в течение ночи), в ISO 16140-3:2021 рекомендуют следовать процедурам, указанным в ГОСТ ISO 11133-2016 раздел 5. В 16140-3:2021 изложено как достигать требуемых уровней инокуляции тестовых порций лабораторного образца. Способы инокуляции на этапе верификации методик и на этапе расчёта стандартного отклонения воспроизводимости, которое потом будет использоваться для расчёта неопределенности, идентичны, но при верификации нам ещё в большей степени важно получить тестовые порции лабораторного образца определенного уровня инокуляции.
Как проводить искусственную контаминацию ("заражение") тестируемых образцов (тестовых порций) ?
Ответ:
В ISO 16140-3:2021 по поводу инокуляции ("заражение") сказано просто и кратко - Подготовленный инокулят вводят непосредственно в исходную суспензию отдельных тестируемых порций. После инокуляции суспензию тщательно перемешивают. Использование стрессированных культур рекомендуется, но не обязательно. Штаммы могут быть от культурных коллекций, пользовательские лабораторные коллекции, эталонные материалы (включая коммерческие эталонные материалы, например, лиофилизированный штамм с известной концентрацией). А по поводу выращивания штамма в питательной среде в условиях, обеспечивающих оптимальный рост штамма (например, культивирование в течение ночи), в ISO 16140-3:2021 рекомендуют следовать процедурам, указанным в ГОСТ ISO 11133-2016 раздел 5. В 16140-3:2021 изложено как достигать требуемых уровней инокуляции тестовых порций лабораторного образца. Способы инокуляции на этапе верификации методик и на этапе расчёта стандартного отклонения воспроизводимости, которое потом будет использоваться для расчёта неопределенности, идентичны, но при верификации нам ещё в большей степени важно получить тестовые порции лабораторного образца определенного уровня инокуляции.
Тел. 8-913-120-97-57
OOO "СофтЛаб" (ООО ТехноЛаб)
Компьютерные программы для лабораторий
E-mail: SfLab@mail.ru
